食品添加劑刺云實(shí)膠檢驗(yàn)方法

A.1 一般規(guī)定

本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑和水在沒有注明其他要求時(shí)，均指分析純?cè)噭┖虶B/T6682規(guī)定的三級(jí)水。試驗(yàn)中所用標(biāo)準(zhǔn)溶液、雜質(zhì)測定用標(biāo)準(zhǔn)溶液、制劑和制品，在沒有注明其他要求時(shí)均按GB/T601、GB/T602、GB/T603之規(guī)定制備。試驗(yàn)中所用溶液在未注明用何種溶劑配制時(shí)，均指水溶液。

A.2 鑒別試驗(yàn)

A.2.1 凝膠試驗(yàn)

取適量試樣溶于水中，在試樣溶液中加入少量硼酸鈉應(yīng)形成凝膠。

A.2.2 黏度試驗(yàn)

取2g試樣，移入400mL燒杯中，用4mL異丙醇使其*濕潤。在劇烈攪拌下加入200mL水，繼續(xù)攪拌，直到膠體*均勻分散，形成乳白色黏稠溶液(該溶液黏度較瓜爾豆膠小，較角豆膠大)。將100mL該溶液移入另一個(gè)400mL燒杯中，在水浴上加熱約10min，冷卻至室溫。該溶液的黏度應(yīng)顯著增加。

A.2.3 膠體組分

A.2.3.1 試劑和材料

A.2.3.1.1 碳酸鋇.

A.2.3.1.2 硫酸溶液：6+94。

A.2.3.1.3 甲醇溶液：2+3。

A.2.3.1.4 半乳糖和甘露糖標(biāo)準(zhǔn)試樣。

A.2.3.1.5 展開劑A：甲酸：丁酮：叔丁醇·水=15∶30∶40：15(體積比)。

A.2.3.1.6 展開劑B：異丙醇：吡啶·醋酸·水=40∶40∶5：20(體積比)。

A.2.3.1.7 噴灑劑：稱取1.23g茴香膠和1.66g苯二甲酸溶于100mL乙醇。

A.2.3.2 儀器和設(shè)備

A.2.3.2.1 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

A.2.3.2.2 薄層色譜板：硅膠G。

A.2.3.3 分析步驟

將200mg試樣與20mL硫酸溶液混合蒸煮3h。冷卻后加入過量的碳酸鋇，不斷攪拌直至pH=7，過濾。將濾液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，于30℃～50℃下蒸發(fā)至得到結(jié)晶或漿狀殘?jiān)瑢⑺梦锶苡?0mL甲醇溶液，即為水解物的溶液。

取兩塊色譜板在起始線上點(diǎn)加1uL～5uL的水解物溶液，以及半乳糖和甘露糖標(biāo)準(zhǔn)試樣各1uL～10uL。兩塊色譜板分別用展開劑A和展開劑B展開。展開后，用噴灑劑噴射色譜板，并在100℃下加熱10min。對(duì)比試樣色斑與標(biāo)準(zhǔn)試樣色斑，應(yīng)有半乳糖和甘露糖組分。

A.2.4 顯微鏡檢查

將經(jīng)研磨后的試樣配制成含碘0.5%、碘化鉀1%的試樣水溶液，放于載玻片上，在顯微鏡下檢驗(yàn)。刺云實(shí)膠顯示圓形至梨形細(xì)胞群，其胞內(nèi)物呈現(xiàn)黃至棕色(瓜爾豆膠的細(xì)胞與刺云實(shí)膠形狀相似，但是尺寸更大。角豆膠則為長管狀細(xì)胞，相互分開或稍有間隙，容易與刺云實(shí)膠分開)。

A.3 灼燒殘?jiān)臏y定

A.3.1 分析步驟

稱取一定量(使后灼燒殘?jiān)苓_(dá)到20mg)的試樣，精雀到0.001g，置于預(yù)先質(zhì)量恒定的地堝，在550℃下灼燒，直到全部碳化且殘?jiān)伾珵榘导t色。放入干燥器冷卻，稱重。如果不能一次全部碳化，可用適量熱水濕潤殘?jiān)貌ＡО魯嚢枋箽堅(jiān)稚ⅲ糜诤嫦渲懈稍铮缓笾貜?fù)灼燒。如果還不能*碳化，改用15mL乙醇濕潤試樣，重復(fù)上述操作。

A.3.2 結(jié)果計(jì)算

灼燒殘?jiān)馁|(zhì)量分?jǐn)?shù)w₁，按式(A.1)計(jì)算

式中：

m₁——坩堝加殘?jiān)馁|(zhì)量，單位為克(g)；

m₂——坩堝的質(zhì)量，單位為克(g)；

m——試樣的質(zhì)量，單位為克(g)。

A.4 酸不溶物的測定

A.4.1 試劑和材料

硫酸溶液：94.5%～95.5%。加一定量已知濃度的硫酸于足夠的水中，使終濃度在上述范圍。

A.4.2 分析步驟

稱取2g試樣，精雀到0.001g，置于250mL燒杯中，加150mL水，1.5mL硫酸溶液。用表面皿蓋住燒杯，置于蒸汽浴上加熱6h，用帶有橡膠頭的攪拌棒經(jīng)常用力擦遍燒杯內(nèi)壁，并補(bǔ)充由蒸發(fā)所損失的水。稱取適宜的酸助濾劑500mg，置于該試樣溶液中，用預(yù)先在105℃±2℃干燥1h的已知重量且裝有石棉墊的布氏坩堝進(jìn)行過濾。用熱水洗滌濾渣數(shù)次，將坩堝連同內(nèi)容物在105℃±2℃干燥3h，在干燥器中冷卻后稱量。總質(zhì)量與助濾劑加坩堝和石棉墊的質(zhì)量之差，即為酸不溶物的量。換算成質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

A.5 蛋白質(zhì)的測定

A.5.1 方法原理

采用凱氏定氮法測定混合物中總氮量。即在有催化劑的條件下，用濃硫酸消化試樣將有機(jī)氮都轉(zhuǎn)變成無機(jī)銨鹽，然后在堿性條件下將銨鹽轉(zhuǎn)化為氨，隨水蒸氣餾出并為過量的酸液吸收，再以標(biāo)準(zhǔn)堿滴定，就可計(jì)算出試樣中的氮量。由于蛋白質(zhì)含氮量比較恒定，可由其氮量計(jì)算蛋白質(zhì)含量。

A.5.2 試劑和材料

A.5.2.1 硫酸鉀.

A.5.2.2 硫酸銅。

A.5.2.3 鋅粒。

A.5.2.4 硫酸。

A.5.2.5 *溶液：400g/L。

A.5.2.6 硼酸溶液：40g/L。

A.5.2.7 甲基紅-亞甲基藍(lán)指示液。

A.5.2.8 硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液：c(H₂SO₄)=0.5mol/L。

A.5.3 儀器和設(shè)備

凱氏儀：由500mL凱氏燒瓶和蒸餾裝置組成。

A.5.4 分析步驟

稱取1g試樣，精雀到0.001g，放入500mL凱氏燒瓶中，加入10g硫酸鉀、500mg硫酸銅和20mL硫酸，緩慢加熱，加熱過程中若有泡沫產(chǎn)生，可使燒瓶傾斜45°，以利于泡沫消去。煮解至溶液為澄清的綠色或幾乎無色且能保持至少30min，冷卻，加入150mL水混勻，繼續(xù)冷卻。小心將100mL*溶液傾入燒瓶底部，在酸溶液的下面形成單獨(dú)的一層。加入適量的鋅粒。立即將燒瓶接上蒸餾裝置，按一般定氮法蒸餾，將鎦出液收集于盛有50mL硼酸溶液的500mL接收瓶中。蒸餾過程中輕輕搖動(dòng)燒瓶，使內(nèi)容物混合均勻，待2/3的液體被收集到接收瓶后，停止蒸餾。向接收瓶中加甲基紅-亞甲基藍(lán)指示液數(shù)滴，用硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定。

同時(shí)用2g蔗糖按上述操作進(jìn)行空白試驗(yàn)。

A.5.5 結(jié)果計(jì)算

蛋白質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w₂，按式(A.2)計(jì)算：

式中：

5.7——蛋白質(zhì)含量與氮含量的換算系數(shù)；

V——消耗的硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，單位為毫升(mL)；

1000——體積單位換算系數(shù)；

c——硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的濃度，單位為摩爾每升(mol/L)；

M——氮的摩爾質(zhì)量，單位為克每摩爾(g/mol)，[M=70.03]；

m₃——試樣的質(zhì)量，單位為克(g)。

A.6 淀粉試驗(yàn)

A.6.1 試劑和材料

碘溶液：稱取碘14g，溶于含有36g碘化鉀的100mL水中，加3滴鹽酸，用水稀釋至1000mL，混勻。

A.6.2 分析步驟

取適量試樣與水按1：10的比例配制試樣溶液，加入幾滴碘溶液。試樣溶液應(yīng)不顯藍(lán)色。